技术平台:
以TurboID技术平台为例,该技术平台在目的蛋白末端融合了突变型生物素连接酶。在过表达细胞中,加入生物素刺激,在10min之内,即可迅速对目的蛋白的相互作用蛋白进行生物素化标记。这一标记过程不仅速度快,背景低,甚至在室温条件下也能顺利进行。因此,TurboID技术平台极大地拓展了其应用范围,不仅适用于哺乳动物细胞体系,还可应用于植物、昆虫等多种生物体系。随后,通过分离富集生物素标记的蛋白质并进行酶切处理,可以轻松获得肽段样品,进而用于质谱分析,从而深入研究蛋白质的相互作用及其功能。
服务内容:
技术优势:
① 催化效率高。
② 不会对活细胞造成损害。
③ 较高的生物素化效率和稳定性。
④ 可以在室温(25°C)下实现有效的生物素化。
应用案例:
项目需求:分析给药处理前后,细胞中与目的蛋白(POI)相互作用蛋白组的变化。
解决方案:利用邻近标记策略,构建POI-TurboID表达载体,在细胞中过表达,分别设置给药组与空白组,生物素化标记。将细胞中蛋白组进行富集后,定性与定量分析生物素化蛋白的差异,以表征POI相互作用蛋白组的变化。
数据展示: