背景介绍：

半胱氨酸的巯基因其显著的反应活性，在蛋白质结构与功能中扮演着关键角色。作为亲核试剂、氧化还原催化中心、金属离子配体以及变构效应的关键位点，它广泛参与并深刻影响蛋白质的活性和调控机制。值得注意的是，半胱氨酸残基易于经历多种类型的翻译后修饰过程，这些修饰不仅能够精密调节蛋白的功能属性，也可能导致其功能受损。鉴于此类修饰与人类众多重大疾病的紧密关联性，对蛋白质中半胱氨酸上翻译后修饰组进行定性和定量分析具有至关重要的意义。这对于深入解析相关蛋白质的生物学功能及其在健康和疾病状态下的作用机理，具有不可或缺的价值。

科络思生物在例如半胱氨酸过硫化修饰的鉴定上有着丰富的经验，创新地利用半胱氨酸通用型探针依据-SH及-SSH pKa的差异，通过调节pH，降低了大量-SH背景干扰，让探针更多地标记-SSH，从而实现对巯基化位点的有效鉴定。

科络思生物具备先进的质谱技术，能够直接且精确地解析多种类型的蛋白质翻译后修饰及其发生的具体位点。通过巧妙结合分离富集技术和同位素标记等先进手段，可以实现对各类修饰的大规模、高通量定性和定量分析，为深入研究蛋白质翻译后修饰提供了强有力的技术支撑。

技术平台：

我们的优势：

1.专业技术优势：团队经验丰富，顶级期刊发表，提供业界权威技术服务，个性化方案，保障最佳实验效果。

2.严谨质量管理：成熟质量管理体系，遵循ISO9001标准，确保报告真实可信。

3.一站式服务：覆盖探针设计、合成、靶点发现、生信分析全流程，咨询到交付一站式，及时反馈进度，保证客户满意度。

4.高性能设备:配备Thermo Fisher Orbitrap Exploris 480、Thermo Flsher Q Exactlve HF-X、Bruker timsTOF等先进质谱仪，助力科研突破。

我们的服务：

代表性修饰：

案例展示：

1.棕榈酰化

     棕榈酰化修饰是生物体内一种重要的蛋白质修饰方式，它利用16碳的棕榈酸通过硫酯键与蛋白质的半胱氨酸残基结合，在调控蛋白质的转运、细胞定位和稳定性等方面发挥关键作用。将细胞裂解、还原并封闭裸露的半胱氨酸后，再经过羟胺处理与特异性的半胱氨酸探针标记，将棕榈酰化修饰置换，再经过酶切、富集等步骤，确定棕榈酰化修饰位点。

棕榈酰化流程图

棕榈酰化实验数据图

2.次磺酸化

     次磺酸化修饰，作为一种广泛存在的蛋白质修饰类型，它能够调整蛋白质的三维构象稳定性、活性表达以及与其他分子间的相互作用网络，在信号传导、酶活性调节、维护细胞内部环境稳定等过程发挥重要作用。将次磺酸化探针WYneN标记的细胞（活细胞水平）进行裂解，随后经Click反应、富集、酶切、位点切割等步骤，确定WYneN探针标记的次磺酸化修饰位点。

次磺酸化探针与流程图

次磺酸化实验数据图

2.巯基化

巯基化指蛋白质的半胱氨酸残基上偶联了过硫酸基团（-SSH），此过程由硫化氢（H2S）介导。为了深入研究这一过程，可以从细胞或组织样本中提取全蛋白质组，采用化学探针标记法（半胱氨酸特异型探针）。这种方法区别于巯基干扰，通过精确调整pH值实现对硫巯基的有效标记。随后，利用高分辨质谱技术，研究人员能够精确地发现硫巯基化的位点，从而进一步揭示该翻译后修饰在生物体内的重要作用。

利用HeLa细胞模型，首先提取其全蛋白质组。随后，通过NaHS造模并调节pH值，使半胱氨酸通用探针能够准确标记硫巯基。经过富集、酶解和质谱检测等一系列步骤，鉴定到180个含有-SSH修饰的肽段，120个相关蛋白，包括已报道的巯基化位点， GAPDH_C152和C247。

以下展示带有-SSH修饰的肽段二级谱图：